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試劑盒實驗異常,可想過是什么原因

發布時間: 2022-01-17  點擊次數: 105次

在使用試劑盒做實驗的時候,有些細節若是做不好會出現實驗異常,或者效果不佳,那么你有想過是什么原因嗎?
·白板異常:顯色步驟結束后,酶標板所有孔均無顏色。陽性對照不顯色。
  這可能是因為:
 1. 試劑已過效期,或不同試劑盒組分混用(解決方式:檢查試劑的組分及批號,確認未過期以及所有組分均屬對應的試劑盒。不同試劑盒或不同批號的試劑不能混用)。
 2. 錯加、漏加試劑底物、顯色劑 A或B(解決方式:嚴格按說明書的步驟操作,加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致,以減少漏加現象)。
 3. 洗板及加樣過程中,酶標受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力(解決方式:確認盛酶標的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等,確認配制洗液的容器已洗干凈)。
 4. 終止液誤作洗滌液稀釋或當底物緩沖液配制(解決方式:每次配制時都應看清標簽標明物質)。
 5. 蒸餾水有問題(解決方式:確認配制洗液的純化水達到要求且未污染,與好蒸餾水比較)。
    



·顯色弱、靈敏度低:實驗結束后,包括陽性對照、質控在內的所有板孔顏色均較淡。 
  這可能是因為:試劑盒超過期, 超過有效期的產品可能會產生很弱的信號;試劑盒沒有按規定進行保存,受高溫影響(實驗前檢查試劑的組分及批號,確認試劑未過期。不要將試劑盒長時間置于常溫下,按使用規定儲藏)。

 1. 試劑、樣品用前未平衡至室溫。如何解決?從低溫冰箱中取出的試劑及樣品應置室溫平衡 20分鐘左右。
 2. 加入試劑的體積和時間有誤,移液器計量不準,吸嘴內水分太多或不清潔。如何解決?確定所使用的試劑體積正確,加入時間適當。 校正移液器,移液器與吸嘴配合要緊密吻合。移液不宜太快,排放應完全。
 3. 洗板及加樣過程中,酶標受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力。如何解決?確認盛酶標的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等,確認配制洗液的容器已洗干凈,確認配制洗液的純化水達到要求且未受污染。
 4. 孵育時間及孵育溫度未達到要求 ,反應板放入培養箱時注意溫度并及時調整。如何解決?孵育溫度應控制在 37-38℃,孵育時間嚴格按照說明書操作。 保溫期內不宜多開門,以免影響保溫。
 5. 洗板次數過多,或濃縮洗液稀釋倍數不符合要求;洗滌沖擊力太大。浸泡時間太長。如何解決?嚴格按說明書要求稀釋濃縮洗液及洗板,減小洗滌沖擊力,按說明書要求置留洗滌液時間和洗滌次數。
 6. 顯色劑加量不足或順序顛倒,或混合后加入。如何解決?顯色劑滴瓶垂直向下,持力均勻,滴速不宜過快,先加顯色劑 A,后加顯色劑B,不可將A、B液混合后加入
 7. 底物作用時間不夠。如何解決?準確定時。
 8. 蒸餾水水質有問題。如何解決?測定蒸餾水配制試劑對酶免疫法的影響。
    

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·實驗結束后,陰陽性對照正常,質控正常,但臨床標本感覺顯色較弱 
1. 待測標本中可能不含強陽性標本,故結果可能是正常的(解決方式:如有懷疑,可復檢)。
2. 標本加入疊氮鈉作為防腐劑(解決方式:酶免實驗中的標本禁用疊氮鈉作為防腐劑,可選用 proclin、硫柳汞等其他防腐劑)。

·陰陽性對照正常,但質控、參考品或個別弱陽性標本未能檢出。
1. 未達要求的孵育溫度及孵育時間可檢出強陽性標本,但質控或弱陽性標本受 溫度變化影響較大而被未檢出(解決方式:質控品或標本避免反復凍融。標本在一周內使用的,可存于 2-8℃,如需長期保存,應置于-20℃以下保存。質控品應小量分裝,并置于-20℃以下保存)。
2. 質控品或標本高溫放置過久,或被反復凍融致待測物滴度下降,而未能檢出(解決方式:重新設定酶標儀的參數,特別是檢查濾光片是否匹配)。
3. 儀器設定不正確,濾光片不匹配(解決方式:重新設定酶標儀的參數,特別是檢查濾光片是否匹配)。


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